Ni NTA 磁珠

  • 別名：Ni NTA Magnetic Beads
  • 編碼：ACQ0171A
  • 級(jí)別：
  • 簡(jiǎn)介：Ni NTA磁珠，基質(zhì)為高交聯(lián)瓊脂糖、四氧化三鐵納米顆粒
品牌 貨號(hào) 包裝規(guī)格 庫(kù)存 價(jià)格 數(shù)量
Seebio ACQ0171A-25ml 25ml 有 2,858 元
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基礎(chǔ)信息

中文名Ni NTA 磁珠
英文名Ni NTA Beads
基質(zhì)高交聯(lián)瓊脂糖、四氧化三鐵納米顆粒
螯合金屬離子Ni2+
金屬離子密度≥20 μmol/mL 磁珠
磁珠濃度10% (v / v)
粒徑分布40-100 μm
載量≥40 mg/mL 磁珠
化學(xué)穩(wěn)定性常規(guī)水相緩沖液，8 M 尿素，6 M 鹽酸胍，1 M 氫氧化鈉

產(chǎn)品介紹

使用須知
本產(chǎn)品須與磁性分離設(shè)備配套使用
磁珠使用前要混合震蕩均勻
磁珠預(yù)處理要充分
孵育時(shí)要保持磁珠處于懸浮狀態(tài)，以保持較大結(jié)合效率
在使用及保存磁珠過(guò)程中，禁止磁珠長(zhǎng)時(shí)間干燥
禁止冷凍，離心磁珠，防止對(duì)磁珠產(chǎn)生不可逆的損傷
建議磁珠僅重復(fù)純化同種蛋白，當(dāng)純化性能降低時(shí)，可進(jìn)行再生處理
應(yīng)避免磁珠因磁吸不完全導(dǎo)致的磁珠損耗
 
使用方法
1. 常用緩沖液
Binding Buffer20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 20 mM Imidazole, pH8.0
Wash Buffer20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 50 mM Imidazole, pH8.0
Elution Buffer-120 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 250 mM Imidazole, pH8.0
Elution Buffer-220 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 500 mM Imidazole, pH8.0
Storage Buffer20% (v/v) Ethanol
 
緩沖液的配制影響目的蛋白的回收率和純度，在純化較大規(guī)模蛋白之前，需做好預(yù)實(shí)驗(yàn)，篩選出適用于目的蛋白的緩沖液體系。
在結(jié)合緩沖液中添加少量咪唑可以減少雜蛋白的吸附；洗脫時(shí)，不確定最佳洗脫咪唑濃度的情況下，推薦使用不同梯度洗脫，并收集上清液做 SDS-PAGE 電泳驗(yàn)證，確定合適的洗脫濃度。
 
 
2.  手動(dòng)純化流程
2.1 樣品制備
細(xì)胞分泌表達(dá)的樣品直接用Binding Buffer稀釋2-3倍，混合均勻備用；
細(xì)胞胞內(nèi)表達(dá)的樣品，用 Binding Buffer 重懸，按需加入蛋白酶抑制劑（例如：終濃度為 1 mM的 PMSF），攪拌混合均勻，冰浴超聲裂解細(xì)胞備用。
 
2.2 磁珠預(yù)處理
取一定量磁珠至 EP 管中，置于磁力架上，使磁珠沉降，移除上層的 Storage Buffer，用與Storage Buffer等體積的 Binding Buffer （例如取400ul 10% V/V的磁珠，磁珠體積是40ul， Storage Solution的體積是360ul，這里加入360ul）洗滌 2-3 次，磁性分離后加Binding Buffer調(diào)整磁珠體積比為10%，保留磁珠備用。
 
2.3 結(jié)合
將磁珠加入步驟 2.1 的樣品中，在室溫下使用混合儀或搖床翻轉(zhuǎn) EP 管，使磁珠充分的分散在樣品溶液中，約30 min 后進(jìn)行磁性分離，移出上清液，留樣檢測(cè)或廢棄（對(duì)于部分易降解的蛋白，建議在 2~8℃下孵育 1 h 以上）。
 
2.4 漂洗
在上一步 EP 管中加入與Storage Buffer等體積的 Wash Buffer，翻轉(zhuǎn)重懸磁珠后進(jìn)行磁性分離，移出上清液，留樣檢測(cè)或廢棄，可根據(jù)需要配制不同咪唑濃度的漂洗液分步漂洗。
 
2.5 洗脫
將與Storage Buffer等體積的 Elution Buffer 加入上一步的 EP 管中，在室溫下使用垂直混合儀或手動(dòng)輕柔翻轉(zhuǎn) EP 管，使磁珠充分的分散，10 min 后進(jìn)行磁性分離，移取上清液至新 EP 管，可根據(jù)需要配制不同咪唑濃度的漂洗液分步漂洗。
注：建議用戶在第一次洗脫后再重復(fù)洗脫 1-2 次，確保目的蛋白充分回收；微球上 90%結(jié)合的目的蛋白在第一次洗脫時(shí)會(huì)被洗脫，因此，之后的洗脫時(shí)間及洗脫液體積均可自定義，翻轉(zhuǎn)混合均勻后磁性分離即可。
 
2.6 磁珠后處理
使用后的磁珠用 Elution Buffer 洗滌 2 次，磁性分離后移除上清液；之后用去離子水洗
滌 2 次，磁性分離后移除上清液；加入 Storage Solution 使磁珠濃度為 10%（v/v），置于 2-8℃保存。
 
 
3. 磁珠再生
Ni NTA Magnetic Beads 瓊脂糖磁珠在連續(xù)使用 8~10 次后，若出現(xiàn)載量明顯下降的現(xiàn)象時(shí)，表明螯合的 Ni2+有部分脫落，建議進(jìn)行再生處理，需準(zhǔn)備以下緩沖液。
 
Stripping Buffer
20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，100 mM EDTA，pH7.4
Beads Washing Buffer
0.5 M NaOH，2 M NaCl
Recharge Buffer
100 mM NiSO4
 
具體操作流程如下：
（1）取結(jié)合性能降低的磁珠至EP 管中，磁性分離移除上清液，加入3倍磁珠體積的 Stripping Buffer，重懸磁珠，在 37℃搖床內(nèi)震蕩混合 30 min，磁性分離，去除上清液，重復(fù) 1 次；
（2）加入3倍磁珠體積的去離子水，手動(dòng)翻轉(zhuǎn) EP 管使磁珠重懸，磁性分離后移除上清液，重復(fù) 2 次；
（3）加入3倍磁珠體積的 Beads Washing Buffer，在室溫下使用垂直混合儀或手動(dòng)輕柔翻轉(zhuǎn) EP 管，使磁珠重懸，5 min 后磁性分離移除上清液；加入3倍磁珠體積的去離子水，手動(dòng)翻轉(zhuǎn) EP 管使磁珠重懸，磁性分離后移除上清液，重復(fù) 3~5 次，至洗滌液呈中性為止；
（4）加入3倍磁珠體積的 Recharge Buffer，在室溫下使用垂直混合儀或手動(dòng)輕柔翻轉(zhuǎn)EP 管，使磁珠重懸，5 min 后磁性分離移除上清液，重復(fù) 2 次；用去離子水洗滌磁珠 5 次以上，確保游離的 Ni2+去除完全；
（5）加入 Storage Solution 使磁珠濃度為 10%（v/v），置于 2-8℃保存。

質(zhì)量指標(biāo)

MSDS

相關(guān)資料

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