胰蛋白酶（Trypsin）作為一類具有高度底物特異性的絲氨酸蛋白酶，被譽為生命科學(xué)基礎(chǔ)研究及生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)中的“基石工具酶”。其獨特的催化機制使其能夠精準(zhǔn)識別并切割多肽鏈中精氨酸（Arg）和賴氨酸（Lys）殘基羧基端的肽鍵，這種高效且特異的酶切能力使其應(yīng)用極為廣泛。在生物制藥工業(yè)中，胰蛋白酶更是不可或缺的工藝酶，深度參與抗體的質(zhì)量控制（如肽圖分析）、重組蛋白疫苗的制備、以及細(xì)胞治療產(chǎn)品（如CAR-T）的生產(chǎn)流程。在基礎(chǔ)科研領(lǐng)域，胰蛋白酶不僅是蛋白質(zhì)組學(xué)中“自下而上”策略的核心酶，用于將復(fù)雜蛋白樣品酶解為適合質(zhì)譜分析的多肽片段，還廣泛應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞傳代與消化。
西寶生物作為生命科學(xué)試劑與技術(shù)服務(wù)供應(yīng)商，依托其成熟的酶工程與蛋白質(zhì)技術(shù)平臺，在胰蛋白酶產(chǎn)品的研發(fā)與應(yīng)用方面構(gòu)建了核心競爭力。該平臺聚焦于高純度、高活性及高穩(wěn)定性的胰蛋白酶制備工藝，通過基因工程重組技術(shù)、先進的層析純化體系以及嚴(yán)格的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，成功推出了系列化的胰蛋白酶產(chǎn)品。
一、產(chǎn)品核心特性
產(chǎn)品為畢赤酵母表達的重組豬胰蛋白酶，在符合 GMP 法規(guī)的環(huán)境下生產(chǎn)，來源于微生物，不含動物源成分，無動物源性病毒污染（如豬流感病毒、豬細(xì)小病毒等），天然缺乏糜蛋白酶活性，其活性受絲氨酸蛋白酶抑制劑（如 PMSF 和 TLCK 等）的抑制。
二、多元應(yīng)用場景：賦能生物科技全產(chǎn)業(yè)鏈
胰蛋白酶憑借 “精準(zhǔn)酶切” 與 “溫和操控” 的雙重特性，能夠完美適配不同應(yīng)用場景的嚴(yán)苛需求。
2.1 生物制藥生產(chǎn)：保障高效與合規(guī)的核心工具
在抗體藥物（mAbs）生產(chǎn)領(lǐng)域，該酶在 CHO、HEK293 等貼壁細(xì)胞的收獲環(huán)節(jié)表現(xiàn)卓越。它能溫和解離細(xì)胞，顯著提升細(xì)胞回收率，同時最大程度降低對細(xì)胞的損傷，保持產(chǎn)物活性。此外，作為蛋白酶切工具，它可用于去除融合標(biāo)簽，且其活性可被苯甲脒完全抑制，這一特性極大地方便了下游純化控制，確保 SEC-HPLC 分析無雜蛋白干擾。
在疫苗生產(chǎn)中，該酶適用于流感疫苗、HPV 疫苗及腺病毒載體疫苗等的細(xì)胞消化流程。其無動物源成分的特性符合疫苗生產(chǎn)的嚴(yán)格法規(guī)要求。應(yīng)用案例顯示，使用重組胰蛋白酶后，細(xì)胞活率可保持在 95% 以上，病毒滴度的批次間一致性提升約 15%，為工藝放大提供了有力支持。
在蛋白藥物質(zhì)量控制與胰島素生產(chǎn)方面，該酶在肽圖分析中通過特異性水解產(chǎn)生清晰且可重復(fù)的肽段圖譜，是藥物身份鑒別和雜質(zhì)分析的關(guān)鍵工具。在門冬胰島素、甘精胰島素等類似物的工業(yè)化生產(chǎn)中，它能精準(zhǔn)切割前體蛋白為活性胰島素分子，從而保證產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)完整性與生物活性。
2.2 細(xì)胞治療與再生醫(yī)學(xué)：維持細(xì)胞活性的關(guān)鍵原料
針對間充質(zhì)干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞及 CAR-T 前體細(xì)胞等敏感細(xì)胞的解離與傳代，重組胰蛋白酶展現(xiàn)出獨特優(yōu)勢。其低內(nèi)毒素和高特異性切割能力，能夠有效減少細(xì)胞膜損傷，維持細(xì)胞高存活率（經(jīng)流式驗證 >95%）及多能性標(biāo)志物的表達。某 CAR-T 企業(yè)的應(yīng)用案例表明，使用該產(chǎn)品后，細(xì)胞回收率提升了 12%，工藝放大失敗率降至 2% 以下。相比傳統(tǒng)膠原酶，它不僅縮短了 50% 的消化時間，且無血清配方的兼容性使其能完美適配多種培養(yǎng)體系。
2.3 生命科學(xué)研究與創(chuàng)新應(yīng)用
在細(xì)胞生物學(xué)研究中，該酶已成為實驗室貼壁細(xì)胞傳代的 “金標(biāo)準(zhǔn)”。其高純度特性降低了細(xì)胞毒性，支持原代細(xì)胞、神經(jīng)元等嬌貴細(xì)胞的長期培養(yǎng)，并有效延長了消化操作的安全窗口。
在生物材料與組織工程領(lǐng)域，該酶用于膠原蛋白、明膠等生物材料的酶法提取。它能精準(zhǔn)去除端肽以降低免疫原性，同時保留關(guān)鍵的三螺旋結(jié)構(gòu)，從而優(yōu)化材料的安全性與理化穩(wěn)定性。此外，它還廣泛應(yīng)用于類器官培養(yǎng)中的基質(zhì)降解，以及智能水凝膠的開發(fā)等前沿創(chuàng)新場景。
三、實驗方案：適配核心應(yīng)用場景
3.1 貼壁細(xì)胞消化（CHO 細(xì)胞 / 干細(xì)胞收獲）
準(zhǔn)備工作需要將胰蛋白酶凍干粉用無鈣鎂 PBS 溶解，配制終濃度為 0.025%-0.25%（重組產(chǎn)品推薦 0.05%-0.25%）的工作液，并可根據(jù)需要加入 0.02% EDTA，隨后將工作液預(yù)熱至 37°C。
樣本處理階段應(yīng)先棄去細(xì)胞培養(yǎng)瓶或反應(yīng)器中的上清液，再用無鈣鎂 PBS 輕輕清洗細(xì)胞層，以去除可能抑制酶活性的殘留血清。
消化孵育時加入適量工作液，輕輕搖晃使酶液均勻覆蓋所有細(xì)胞表面，隨后在 37°C 條件下孵育 2-5 分鐘，并在期間通過顯微鏡觀察細(xì)胞狀態(tài)。
在觀察到細(xì)胞變圓并開始脫落后立即進行，需加入含血清的培養(yǎng)基或大豆胰蛋白酶抑制劑終止反應(yīng)，再輕柔吹打制成單細(xì)胞懸液，最后以 1200 rpm 離心 5 分鐘（或 1000 rpm 離心 5 分鐘）收集細(xì)胞，用于后續(xù)傳代或工藝步驟。
3.2 蛋白質(zhì)酶解（質(zhì)譜分析前處理）
復(fù)溶儲存時，需使用 50mM 乙酸將凍干粉配制成 1mg/mL 的儲存液，建議分裝后置于 -20°C 保存，以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致酶活下降。
底物準(zhǔn)備階段，應(yīng)將還原烷基化后的蛋白質(zhì)溶解于 50mM NH?HCO?緩沖液（pH≈8.0）中，并將濃度調(diào)整為 1mg/mL 備用。
酶切反應(yīng)可按酶：底物 = 1:50（質(zhì)量比）的比例加入胰蛋白酶工作液，隨后在 37°C 條件下孵育 4-16 小時。
終止與檢測步驟中，可加入甲酸至終濃度 0.1%-1% 以終止反應(yīng)，水解產(chǎn)物經(jīng)脫鹽處理后即可進行 LC-MS/MS 分析。
四、驗證實驗
圖例解釋:正常培養(yǎng)的HEK293細(xì)胞，分別用胰蛋白酶消化（貨號DCE0060R），從左到右濃度為0.025m/mL、0.05mg/mL，37℃消化270s。觀察細(xì)胞消化狀態(tài)。
圖例解釋：細(xì)胞密度:6.78 X 105 Cells/ml，存活率:93.83%。（驗證貨號：DCE0060S）
西寶提供胰蛋白酶列表
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 濃度 | 規(guī)格 |
Seebio | DCE0060S | 重組胰蛋白酶 LS(細(xì)胞消化用） | 0.025mg/ml | 40ml |
Seebio | DCE0060T | 重組胰蛋白酶（質(zhì)譜級）凍干/非凍干 | 100ug | |
Seebio | DCE0060P | 胰蛋白酶（牛胰） 1：2500 | 精制級，1：2500， ≥2500 USP U/mg | 5g |
Seebio | DCE0060O | 胰蛋白酶（豬胰）1：250 | BR，1:250 | 5g/ 50g |
Seebio | DCE0060N | 胰蛋白酶（豬胰）1：2500 | ≥2500U/mg | 5g |
Seebio | DCE0060C | 胰蛋白酶 1:300 | 10g | |
Seebio | DCE0060A | 胰蛋白酶 1:250 | 250U/mg | 50g/250g |
五、常見問題（FAQ）
5.1 為什么胰蛋白酶處理后，細(xì)胞活性顯著下降或大量死亡？
消化過度是最常見原因。胰蛋白酶不僅切割細(xì)胞與培養(yǎng)皿之間的粘連蛋白，也會對細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物產(chǎn)生影響。研究表明，胰蛋白酶處理會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)小分子代謝物（如氨基酸）泄漏，并引起細(xì)胞體積和膜張力的變化，從而影響細(xì)胞活力。
解決方案：
* 精確控制時間：消化時間并非固定不變，需在顯微鏡下密切觀察，一旦細(xì)胞間隙增大、形態(tài)變圓，立即終止消化。
* 降低濃度與溫度：對于敏感細(xì)胞，可嘗試使用更低濃度的胰蛋白酶（如0.05%），或在室溫（而非37°C）下進行短時間消化。
* 充分中和：消化后立即加入足量含血清的完全培養(yǎng)基，并輕柔吹打均勻，確保胰蛋白酶被完全中和。
5.2 細(xì)胞解離后總是聚集成團，難以形成單細(xì)胞懸液，影響計數(shù)和后續(xù)實驗。
吹打不充分；消化過度導(dǎo)致細(xì)胞釋放DNA，使懸液粘稠；細(xì)胞本身粘附性強。
解決方案：
* 輕柔充分吹打：用移液器吸取培養(yǎng)基，沿培養(yǎng)皿底面反復(fù)、輕柔地吹打，注意覆蓋所有區(qū)域。
* 過濾：通過40μm細(xì)胞篩網(wǎng)過濾細(xì)胞懸液，可有效去除大的細(xì)胞團塊。
* 添加DNase I：如果因細(xì)胞死亡導(dǎo)致DNA釋放，可在中和培養(yǎng)基中加入少量DNase I（終濃度10-20 U/mL）以降解DNA，減少粘性。
5.3 胰蛋白酶消化是否會破壞我需要檢測的細(xì)胞表面蛋白（如流式抗體靶點）？
會，這是非常常見的問題。胰蛋白酶是一種蛋白酶，會切割細(xì)胞表面蛋白的特定肽鍵，可能導(dǎo)致抗原表位被破壞，影響抗體的結(jié)合，造成假陰性或信號減弱。
解決方案：
* 實驗驗證：對于關(guān)鍵表面標(biāo)志物，需通過實驗驗證胰蛋白酶處理后的檢測效果。消化后，讓細(xì)胞在完全培養(yǎng)基中于37°C恢復(fù)培養(yǎng)30分鐘至數(shù)小時，有助于部分表面蛋白的再生或重新分布。
* 替代方法：對于特別敏感的標(biāo)志物，考慮使用不含酶的細(xì)胞解離緩沖液（如含EDTA的緩沖液）。
5.4 細(xì)胞離心重懸后，發(fā)現(xiàn)再次聚集成團，怎么辦？
解決方案：離心后，棄上清，不要立即加入大量培養(yǎng)基。先加入少量培養(yǎng)基（如100μL），用手指輕彈管底，將細(xì)胞沉淀徹底彈散，形成濃稠但均勻的細(xì)胞糊，然后再緩慢加入剩余培養(yǎng)基稀釋，這樣能有效防止因表面張力導(dǎo)致的細(xì)胞成團。
5.5 如何全面評估一次胰蛋白酶消化后的細(xì)胞狀態(tài)是否合格？
評估指標(biāo)
* 即時指標(biāo)：臺盼藍染色活率 >90%；顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)飽滿、透亮，無過多碎片。
* 短期指標(biāo)：細(xì)胞接種后，在預(yù)期時間內(nèi)（通常6-24小時）能重新貼壁并展開。
* 功能指標(biāo)：細(xì)胞生長曲線正常，倍增時間穩(wěn)定；用于后續(xù)實驗（如分化、轉(zhuǎn)染、處理）時，反應(yīng)符合預(yù)期。
胰蛋白酶（Trypsin）作為一類具有高度底物特異性的絲氨酸蛋白酶，被譽為生命科學(xué)基礎(chǔ)研究及生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)中的“基石工具酶”。其獨特的催化機制使其能夠精準(zhǔn)識別并切割多肽鏈中精氨酸（Arg）和賴氨酸（Lys）殘基羧基端的肽鍵，這種高效且特異的酶切能力使其應(yīng)用極為廣泛。在生物制藥工業(yè)中，胰蛋白酶更是不可或缺的工藝酶，深度參與抗體的質(zhì)量控制（如肽圖分析）、重組蛋白疫苗的制備、以及細(xì)胞治療產(chǎn)品（如CAR-T）的生產(chǎn)流程。在基礎(chǔ)科研領(lǐng)域，胰蛋白酶不僅是蛋白質(zhì)組學(xué)中“自下而上”策略的核心酶，用于將復(fù)雜蛋白樣品酶解為適合質(zhì)譜分析的多肽片段，還廣泛應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞傳代與消化。
西寶生物作為生命科學(xué)試劑與技術(shù)服務(wù)供應(yīng)商，依托其成熟的酶工程與蛋白質(zhì)技術(shù)平臺，在胰蛋白酶產(chǎn)品的研發(fā)與應(yīng)用方面構(gòu)建了核心競爭力。該平臺聚焦于高純度、高活性及高穩(wěn)定性的胰蛋白酶制備工藝，通過基因工程重組技術(shù)、先進的層析純化體系以及嚴(yán)格的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，成功推出了系列化的胰蛋白酶產(chǎn)品。
一、產(chǎn)品核心特性
產(chǎn)品為畢赤酵母表達的重組豬胰蛋白酶，在符合 GMP 法規(guī)的環(huán)境下生產(chǎn)，來源于微生物，不含動物源成分，無動物源性病毒污染（如豬流感病毒、豬細(xì)小病毒等），天然缺乏糜蛋白酶活性，其活性受絲氨酸蛋白酶抑制劑（如 PMSF 和 TLCK 等）的抑制。
二、多元應(yīng)用場景：賦能生物科技全產(chǎn)業(yè)鏈
胰蛋白酶憑借 “精準(zhǔn)酶切”與 “溫和操控” 的雙重特性，能夠完美適配不同應(yīng)用場景的嚴(yán)苛需求。
2.1 生物制藥生產(chǎn)：保障高效與合規(guī)的核心工具
在抗體藥物（mAbs）生產(chǎn)領(lǐng)域，該酶在 CHO、HEK293 等貼壁細(xì)胞的收獲環(huán)節(jié)表現(xiàn)卓越。它能溫和解離細(xì)胞，顯著提升細(xì)胞回收率，同時最大程度降低對細(xì)胞的損傷，保持產(chǎn)物活性。此外，作為蛋白酶切工具，它可用于去除融合標(biāo)簽，且其活性可被苯甲脒完全抑制，這一特性極大地方便了下游純化控制，確保 SEC-HPLC 分析無雜蛋白干擾。
在疫苗生產(chǎn)中，該酶適用于流感疫苗、HPV 疫苗及腺病毒載體疫苗等的細(xì)胞消化流程。其無動物源成分的特性符合疫苗生產(chǎn)的嚴(yán)格法規(guī)要求。應(yīng)用案例顯示，使用重組胰蛋白酶后，細(xì)胞活率可保持在 95% 以上，病毒滴度的批次間一致性提升約 15%，為工藝放大提供了有力支持。
在蛋白藥物質(zhì)量控制與胰島素生產(chǎn)方面，該酶在肽圖分析中通過特異性水解產(chǎn)生清晰且可重復(fù)的肽段圖譜，是藥物身份鑒別和雜質(zhì)分析的關(guān)鍵工具。在門冬胰島素、甘精胰島素等類似物的工業(yè)化生產(chǎn)中，它能精準(zhǔn)切割前體蛋白為活性胰島素分子，從而保證產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)完整性與生物活性。
2.2 細(xì)胞治療與再生醫(yī)學(xué)：維持細(xì)胞活性的關(guān)鍵原料
針對間充質(zhì)干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞及 CAR-T 前體細(xì)胞等敏感細(xì)胞的解離與傳代，重組胰蛋白酶展現(xiàn)出獨特優(yōu)勢。其低內(nèi)毒素和高特異性切割能力，能夠有效減少細(xì)胞膜損傷，維持細(xì)胞高存活率（經(jīng)流式驗證 >95%）及多能性標(biāo)志物的表達。某 CAR-T 企業(yè)的應(yīng)用案例表明，使用該產(chǎn)品后，細(xì)胞回收率提升了 12%，工藝放大失敗率降至 2% 以下。相比傳統(tǒng)膠原酶，它不僅縮短了 50% 的消化時間，且無血清配方的兼容性使其能完美適配多種培養(yǎng)體系。
2.3 生命科學(xué)研究與創(chuàng)新應(yīng)用
在細(xì)胞生物學(xué)研究中，該酶已成為實驗室貼壁細(xì)胞傳代的“金標(biāo)準(zhǔn)”。其高純度特性降低了細(xì)胞毒性，支持原代細(xì)胞、神經(jīng)元等嬌貴細(xì)胞的長期培養(yǎng)，并有效延長了消化操作的安全窗口。
在生物材料與組織工程領(lǐng)域，該酶用于膠原蛋白、明膠等生物材料的酶法提取。它能精準(zhǔn)去除端肽以降低免疫原性，同時保留關(guān)鍵的三螺旋結(jié)構(gòu)，從而優(yōu)化材料的安全性與理化穩(wěn)定性。此外，它還廣泛應(yīng)用于類器官培養(yǎng)中的基質(zhì)降解，以及智能水凝膠的開發(fā)等前沿創(chuàng)新場景。
三、實驗方案：適配核心應(yīng)用場景
3.1 貼壁細(xì)胞消化（CHO 細(xì)胞 / 干細(xì)胞收獲）
準(zhǔn)備工作需要將胰蛋白酶凍干粉用無鈣鎂 PBS 溶解，配制終濃度為 0.025%-0.25%（重組產(chǎn)品推薦 0.05%-0.25%）的工作液，并可根據(jù)需要加入 0.02% EDTA，隨后將工作液預(yù)熱至 37°C。
樣本處理階段應(yīng)先棄去細(xì)胞培養(yǎng)瓶或反應(yīng)器中的上清液，再用無鈣鎂 PBS 輕輕清洗細(xì)胞層，以去除可能抑制酶活性的殘留血清。
消化孵育時加入適量工作液，輕輕搖晃使酶液均勻覆蓋所有細(xì)胞表面，隨后在 37°C 條件下孵育 2-5 分鐘，并在期間通過顯微鏡觀察細(xì)胞狀態(tài)。
在觀察到細(xì)胞變圓并開始脫落后立即進行，需加入含血清的培養(yǎng)基或大豆胰蛋白酶抑制劑終止反應(yīng)，再輕柔吹打制成單細(xì)胞懸液，最后以 1200 rpm 離心 5 分鐘（或 1000 rpm 離心 5 分鐘）收集細(xì)胞，用于后續(xù)傳代或工藝步驟。
3.2 蛋白質(zhì)酶解（質(zhì)譜分析前處理）
復(fù)溶儲存時，需使用 50mM 乙酸將凍干粉配制成 1mg/mL 的儲存液，建議分裝后置于 -20°C 保存，以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致酶活下降。
底物準(zhǔn)備階段，應(yīng)將還原烷基化后的蛋白質(zhì)溶解于 50mM NH?HCO?緩沖液（pH≈8.0）中，并將濃度調(diào)整為 1mg/mL 備用。
酶切反應(yīng)可按酶：底物 = 1:50（質(zhì)量比）的比例加入胰蛋白酶工作液，隨后在 37°C 條件下孵育 4-16 小時。
終止與檢測步驟中，可加入甲酸至終濃度 0.1%-1% 以終止反應(yīng)，水解產(chǎn)物經(jīng)脫鹽處理后即可進行 LC-MS/MS 分析。
四、驗證實驗
圖例解釋:正常培養(yǎng)的HEK293細(xì)胞，分別用胰蛋白酶消化（貨號DCE0060R），從上到下濃度為0.025m/mL、0.05mg/mL，37℃消化270s。觀察細(xì)胞消化狀態(tài)。
圖例解釋：細(xì)胞密度:6.78 X 105 Cells/ml，存活率:93.83%。（驗證貨號：DCE0060S）
西寶提供胰蛋白酶列表
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 濃度 | 規(guī)格 |
Seebio | DCE0060S | 重組胰蛋白酶 LS(細(xì)胞消化用） | 0.025mg/ml | 40ml |
Seebio | DCE0060T | 重組胰蛋白酶（質(zhì)譜級）凍干/非凍干 | 100ug | |
Seebio | DCE0060P | 胰蛋白酶（牛胰） 1：2500 | 精制級，1：2500， ≥2500 USP U/mg | 5g |
Seebio | DCE0060O | 胰蛋白酶（豬胰）1：250 | BR，1:250 | 5g/ 50g |
Seebio | DCE0060N | 胰蛋白酶（豬胰）1：2500 | ≥2500U/mg | 5g |
Seebio | DCE0060C | 胰蛋白酶 1:300 | 10g | |
Seebio | DCE0060A | 胰蛋白酶 1:250 | 250U/mg | 50g/250g |
五、常見問題（FAQ）
5.1 為什么胰蛋白酶處理后，細(xì)胞活性顯著下降或大量死亡？
消化過度是最常見原因。胰蛋白酶不僅切割細(xì)胞與培養(yǎng)皿之間的粘連蛋白，也會對細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物產(chǎn)生影響。研究表明，胰蛋白酶處理會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)小分子代謝物（如氨基酸）泄漏，并引起細(xì)胞體積和膜張力的變化，從而影響細(xì)胞活力。
解決方案：
* 精確控制時間：消化時間并非固定不變，需在顯微鏡下密切觀察，一旦細(xì)胞間隙增大、形態(tài)變圓，立即終止消化。
* 降低濃度與溫度：對于敏感細(xì)胞，可嘗試使用更低濃度的胰蛋白酶（如0.05%），或在室溫（而非37°C）下進行短時間消化。
* 充分中和：消化后立即加入足量含血清的完全培養(yǎng)基，并輕柔吹打均勻，確保胰蛋白酶被完全中和。
5.2 細(xì)胞解離后總是聚集成團，難以形成單細(xì)胞懸液，影響計數(shù)和后續(xù)實驗。
吹打不充分；消化過度導(dǎo)致細(xì)胞釋放DNA，使懸液粘稠；細(xì)胞本身粘附性強。
解決方案：
* 輕柔充分吹打：用移液器吸取培養(yǎng)基，沿培養(yǎng)皿底面反復(fù)、輕柔地吹打，注意覆蓋所有區(qū)域。
* 過濾：通過40μm細(xì)胞篩網(wǎng)過濾細(xì)胞懸液，可有效去除大的細(xì)胞團塊。
* 添加DNase I：如果因細(xì)胞死亡導(dǎo)致DNA釋放，可在中和培養(yǎng)基中加入少量DNase I（終濃度10-20 U/mL）以降解DNA，減少粘性。
5.3 胰蛋白酶消化是否會破壞我需要檢測的細(xì)胞表面蛋白（如流式抗體靶點）？
會，這是非常常見的問題。胰蛋白酶是一種蛋白酶，會切割細(xì)胞表面蛋白的特定肽鍵，可能導(dǎo)致抗原表位被破壞，影響抗體的結(jié)合，造成假陰性或信號減弱。
解決方案：
* 實驗驗證：對于關(guān)鍵表面標(biāo)志物，需通過實驗驗證胰蛋白酶處理后的檢測效果。消化后，讓細(xì)胞在完全培養(yǎng)基中于37°C恢復(fù)培養(yǎng)30分鐘至數(shù)小時，有助于部分表面蛋白的再生或重新分布。
* 替代方法：對于特別敏感的標(biāo)志物，考慮使用不含酶的細(xì)胞解離緩沖液（如含EDTA的緩沖液）。
5.4 細(xì)胞離心重懸后，發(fā)現(xiàn)再次聚集成團，怎么辦？
解決方案：離心后，棄上清，不要立即加入大量培養(yǎng)基。先加入少量培養(yǎng)基（如100μL），用手指輕彈管底，將細(xì)胞沉淀徹底彈散，形成濃稠但均勻的細(xì)胞糊，然后再緩慢加入剩余培養(yǎng)基稀釋，這樣能有效防止因表面張力導(dǎo)致的細(xì)胞成團。
5.5 如何全面評估一次胰蛋白酶消化后的細(xì)胞狀態(tài)是否合格？
評估指標(biāo)
* 即時指標(biāo)：臺盼藍染色活率 >90%；顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)飽滿、透亮，無過多碎片。
* 短期指標(biāo)：細(xì)胞接種后，在預(yù)期時間內(nèi)（通常6-24小時）能重新貼壁并展開。
* 功能指標(biāo)：細(xì)胞生長曲線正常，倍增時間穩(wěn)定；用于后續(xù)實驗（如分化、轉(zhuǎn)染、處理）時，反應(yīng)符合預(yù)期。
